Q1：一张芯片上可以做不同组织类型的样品吗？
A：不推荐。因为不同组织类型的样品需要不同透化条件测试，同时也要避免包埋时组织间出现交叉污染。此外，组织贴到芯片上需要迅速进行下一步实验操作，向芯片连续贴多张切片存在一定操作难度和风险。无法实现2台冷冻切片机中的2个OCT包埋块切片贴到同一张芯片上，无法保证1台冷冻切片机中2个OCT包埋块切片贴到同一芯片上的数据表现。
Q2：组织与OCT之间有间隙对实验会有什么影响？
A：OCT作为包埋剂可以在切片和展片过程中对组织起到支持作用。如果没有OCT的支持，组织在切片过程中易皱、易碎，同时组织与OCT分离的位置容易卷曲，不利于贴片操作。
Q3：骨头样本是否可以进行空间转录组？
A：可以，但存在较大风险。一方面骨头样本严重钙化，粘附性不强，容易脱片，通常需进行脱钙处理，以增强其在玻片上的粘附性。二是骨头样本的细胞密度低，细胞的RNA含量低，导致最终单个spot捕获的细胞数少，中位基因数低。
Q4：有不同空转技术之间的对比吗？
A：透化测试是用于摸索组织切片最佳透化时间的预实验。透化测试芯片上载有核苷酸捕获探针，与组织切片结合后通过探针原位捕获组织内的 mRNA 分子，再利用带有荧光标记的核苷酸进行 cDNA 合成。通过荧光显微镜成像可以快速判断特定组织的最佳透化时间。选择最佳的透化条件，便于 mRNA 捕获：
透化 3min 时，组织呈现同一皮层亮度不均匀的情况，说明透化不充分；
透化 12min 时，细节清晰，信号均匀，亮度最大；
透化 24min 时的信号弱于透化 12min 的信号，因此，最佳的透化时间是 12min。
图. 透化测试荧光显微镜成像图
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